INTRINSIC AND PROBE FLUORESCENCE OF ATHEROGENIC LIPOPROTEINS OF HUMAN SERUM AND AORTA
Abstract
In total fraction of low and very low density lipoproteins (LDL+VLDL) isolated from serum by precipitation at the presence of heparinum-Mn copper-induced lipid peroxidation (LPO) during incubation at 37oC al present of 50 liM CuS04 was accompanied by accumulation of LPO products (TBA-reactive products, TBARP), decrease fluorescence intensity (F) of a probe-anion ANS and increase of probe -cation DSP-6, decrease of intrinsic fluorescence intensity in ultraviolet area of a spectrum (Fuv) and increase - in visible area of a spectrum (Fvis). It was suggested to calculate the Fvis / Fuv and FDSP-6 / FANS ratio in order to determine degree of lipoproteins modification. Good relationship was revealed between these ratio's and degree of LPO on LDL+VLDL isolated from serum of 49 donors and incubated at 37oC at present of 50 uM CuS04 during 0, 3 and 24 hrs. LDL+VLDL isolated from human aorta of 6 persons significantly differ from native LDL+VLDL isolated from serum of 49 donors by Fvis / Fuv, FDSP-6 / FANS ratio and level of TBARP (p<0.001) and correspond by all these parameters to serum lipoproteins oxidated in vitro by incubation at 37oC at present of 50 pM CuS04 during more than 3 and less than 24 hrs.
Keywords:
atherogenic lipoproteins, fluorescence,lipid peroxidation, aorta.References
1. Дислипопротеидемии и ишемическая болезнь сердца (под ред. Чазова Е. И. и Климова А. Н.). М. 1980.
2. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Лииопрогеиды, дислипопротеидемии и атеросклероз. Л. Медицина. 1984.
3. Лопухин Ю.М., Арчаков А.П., Владимиров Ю.А., Коган Э.М. Холестериноз (холестерин мембран. Теоретические и клинические аспекты). М.Медицина. 1983.
4. Оганов Р. Г. Первичная профилактика ишемической болезни сердца, М. 1990.
5. Айтбаев К.А., Айдыралиев Р.К., Игембердиева О.А. Окисленные липоиротеиды низкой плотности: биохимический состав, механизмы формирования, биологическая активность и связь с коронарной болезнью сердца// ЦАМЖ. - 2005. - Т. 11. - № 1. - С. 61-68.
6. Mertens A., Hoivoet P. Oxidized LDL and HDL: antagonists in atherothrombosis// FASEB J. - 2001. - V.15. - P. 2073-2084.
7. Tribble D. L. Lipoprotein oxidation in dyslipidemia: insights into general mechanisms affecting lipoprotein
oxidative behavior/'/ Curr. Opin. Lipidol. - 1995. - V. 6. - № 4. - P. 196-208.
8. Hoivoet P., Mertens A.,Verhamme P., Bogaerts K., Beyens G.,Verhaeghe R., Collen D., Muls E.,vande Werf F. Circulating oxidized LDL is a useful marker for identifying patients with coronary artery disease// Arterioscler. Tromb. Vase. Biol. - 2001. - V. 21. - P. 844-848.
9. Toshima S., Hasegawa A., Kurabayashi М., Itabe H., Takano Т., Sugano J., Shimamura K., Kimura J., Michishita 1.. Suzuki Т., Nagai R. Circulating oxidized low density lipoprotein levels a biochemical risk marker for coronary heart disease// Arterioscler. Tromb. Vase. BioJ. - 2000. - V. 20. - P. 2243-2247.
10. Айдыралиев P.K., Азизова О.А., Вахрушева T.B., Лопухин Ю.М., Миррахимов М.М. Исследование собственной флюоресценции ЛПНП, модифицированных в результате автоокисления// Бюлл. Эксп.Баал, и Мед. -2006. - Т. 142. - № 10. - С. 414-417.
11. Сергиенко В.И., М урина М .А., Панасенко OLM., Трунилина Н.Н., Евгина С.А., Айдыралиев Р.К., Лхцупкин Д.И. Молекулярные механизмы действия пюохлорита натрия на тромбоциты и липопротеины/Вестник РАМН. - 1995. - № 3. - С. 48-53.
12.Panasenko О.М., Evgina S.A.. Aidyraliev R.K., N-’-gienko V.I., Vladimirov Y.A. Peroxidation o f human : ood lipoproteins induced by exogenous hypochlorite or k y p o c h lo rite g e n e ra te d in th e sy stem o f ’—.'-eloperoxidasc+H202+Cl-"// FreeRadic. Biol. Med.- 4. - V. 16. - N 2. - P. 143-148.
13. Айдыралиев P.K. Исследование перекисно- мелнфицированных липопротеинов низкой плотности методом флуоресцентной спектроскопии// Известия НАН КР. - 2005. - № 3. - С. 66-70.
14. Айдыралиев Р.К. Изменения собственной и гедовой флуоресценции липопротеинов низкой плотности: ста при перекисной модификации// Журнал АМН Украины. - 2005. - Т. 11. - № 2. - С.382-391.
15. Айдыралиев Р.К., Азизова О.А., Миррахимов V.M ., Лопухин Ю.М. Изменение заряда поверхности липопротеинов низкой плотности при перекисной ж?днфикации// Бюлл. Эксп. Биол. и Мед. - 2001. - _ 1 3 2 ,-№ 8 .-С . 164-167.
16. M anual o f laboratory operations. Lipid research . :r.ics program. Volume 1. Lipid and lipoprotein analysis.
DHEW Publication No. NIH 75628.
17. Рагино Ю.И., Душкин М.И. Простой метод исследования резистентности к окислению гепарилсаж дснны х -липопротеинов сыворотки крови// Клин. Лаб. Диагн. - 1998. - № 3. - С. 6-8.
18. Игембердиева О.А., Айдыралиев Р.К., Алымкулова А., Айтбаев К.А. Изменения собственной и юндовой флуоресценции в липопротеинах низкой и тен ь низкой плотности, выделенных осаждением в присутствии гепарина-Mn// ЦАМЖ. 2004. - Т. 10. - Л? 1. - С.13-15.
19. HofFH.F., Morton R.E. Lipoproteins containingapo В extracted from human aortas. Structure and function// Ann N. Y. Acad. Sci. - 1985. - V. 454. - P. 183-94.
20. Добрецов Г.Е., Спирин M.M., Кузнецов A.C.,Попов А.В. Пространственная организация липопротеидов низкой плотности аорты человека (изучение с помощью флуоресцентных зондов)// Бюлл. Эксп. Биол. и Мед. - 1983. - Т. 96. - № 10. - С. 45-47.
21. Dobretsov G. Е, Spirin М. М, Chckrygin O.V.,Karmansky I. М., Dmitriev V.M., Vladimirov Yu.A. A fluorescence study of apolipoprotein localization in relation to lipids in serum low density lipoproteins// Biochim. et Biophys. Acta. -1982. - V. 710. - № 2. - P. 172-180.
22. Jache? W„ Tomasik A., Ceglarek W„ Wo? S.,Wodniecki J., Wojciechowska C., Skrzep-Poloczek B.,Walichiewicz P., Widcnka K. Lipid peroxidation and vitamin E in human coronary atherosclerotic lesions// Clin. Chim. Acta. - 2003. - V. 330. - № 1-2. - P. 121-129.
23. Suama C., Dean R.T., May J., Stocker R. Human atherosclerotic plaque contains both oxidized lipids and relatively large amounts of alpha-tocopherol and ascorbate// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 1995. -V. 15.-№ 10.-P. 1616-24.
24. Hoff H.F, O'Neil J. Extracts of human atherosclerotic lesions can modify low density lipoproteins leading to enhanced uptake by macrophages// Atherosclerosis. - 1988. - V. 70. - № 1-2. - P. 29-41.
25. Климов A.H., Ловягина Т. H., Баньковская Э.Б. Турбидиметрический метод определения липопротеидов и хиломикронов в сыворотке крови и тканях // Лабораторное дело. -1966. - № 4. - С. 276- 279.
26. Uchiyama М., Michara М. Determination of malonaldehyde precursor in tissues by thiobarbituric acidtest//Analytical Biochemistry. - 1978. - V. 86. - P. 271 - 278.
27. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent/ / J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193.-№ 1. - P. 265-275.
